TUNEL-IF凋亡荧光法

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TUNEL凋亡荧光法


胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的阶段性过程。染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300 kb的大片段,然后大约30%的染色体DNA在Ca2+和Mg2+依赖的核酸内切酶作用下,在核小体单位之间被随机切断,形成180-200 bp核小体DNA多聚体。因此在细胞凋亡晚期,DNA会被降解为180-200 bp的片段,断裂的基因组DNA上暴露出大量的3'-OH末端。末端脱氧核糖核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)是一种不依赖于模板的DNA聚合酶,可以催化脱氧核苷酸结合到断裂的DNA分子3'-OH末端。因此在TdT酶的作用下,在基因组DNA断裂时暴露出的3´-OH末端掺入荧光素标记的dUTP(FITC-12-dUTP),从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测(FITC激发450-500 nm,发射515-565 nm)。



验流程

TUNEL-IF凋亡荧光法(图1)

结果展示




TUNEL-IF凋亡荧光法(图2) TUNEL-IF凋亡荧光法(图3) TUNEL-IF凋亡荧光法(图4) 

                                              merge                                                                                        DAPI                                                                          TNUEL-IF





实验完成周期及交付标准


1. 实验周期:2-3周

2. 交付标准:蜡块、切片、染色图片、实验报告(实验步骤、试剂、耗材等)


需确认的信息


1. 样本的种属及类型(组织or细胞)

2. 样本的类型(固定的组织or蜡块or切片)

3. 拍照要求



石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡荧光(图2)