常见实验项目样本收集、保存、运输要求

一、分子生物学平台

1. 荧光定量PCR样本收集运输

A.细胞：

a.贴壁细胞

以6孔板培养的细胞为例，吸掉培养基，用PBS洗一次，吸掉PBS，加1ml  Trizol，将底部细胞吹打起来，转入1.5mlEP管，裂解细胞。-80度冻存，干冰运输。

b.悬浮细胞

将培养基及细胞转入1.5 mLEP管，5000转3 min离心，离心完吸掉上清，加1 mL  Trizol，吹打混匀，裂解细胞。-80度冻存，干冰运输。

c.贴壁细胞和悬浮细胞混合

将底部细胞吹打起来，转入1.5 mL EP管，5000转3 min离心，离心完吸掉上清，加1 mL  Trizol，吹打混匀，裂解细胞。-80度冻存，干冰运输。

B.组织：

客户提供的组织，质量请勿低于100 mg，约黄豆粒大小，可直接-80度冻存，干冰运输，也可加入1 mL Trizol后，再行-80度冻存，干冰运输

C.骨类:

液氮条件下粉碎，之后再加入1 mL Trizol研磨，-80度冻存，干冰运输。

D.其他形式样本:

a.血清、血浆、尿液样本

请提供至少1 mL样本；请在采集样本时立即加入专&用trizol，推荐使用invitrogen公司的Trizol LS

该产品的使用比例为样本体积：Trizol体积=1:3。-80度冻存，干冰运输。液体样本不建议直接冻存，请一定在采集样本时加入专&用trizol再行冻存寄送。

b.全血

新鲜抗凝全血，按照1:3加入1×红细胞裂解液，裂解10 min，12000 转3 min离心，倒掉废液，留存管底外周血单个核细胞沉淀，加1 mL  Trizol，吹打混匀，-80度冻存，干冰运输。

2.ELISA/生化检测样本收集运输

(1) 组织样品：黄豆粒大小组织样本，冻存，低温液氮或干冰运输。

(2) 血清 24小时内处理：全血样品于室温放置2h或4℃静置过夜，1000 r/min离心20 min，取上清待测。

(3) 血浆 24小时内处理：用抗凝管收集血样或往血样品中加抗凝剂，1000 r/min离心15 min，取上清待测。

(4) 细胞培养上清：取细胞培养上清1000 r/min离心20 min，取上清待测。

(5) 其他液体样品 如尿液，透析液等 ：1000 r/min离心20 min，取上清待测。

注意：

a.样品处理后的上清可-20℃保存1个月或-80℃保存6个月；

b.如果取得上清比较浑浊,可稍微提高转速将上清再次离心。

二、Western Blot平台

1.样本种类

细胞 、动物组织如心、肝、脾、肺、肾、胰、角膜、血管、脊髓、脑等

2.样本收集

(1)组织样本：

客户提供的组织，质量请勿低于100 mg，约黄豆粒大小，可-20度冻存，干冰运输。

(2)细胞样本：

a．贴壁细胞，数量不低于1*10^6个，将细胞用胰酶消化下来转入EP管，5000 rpm离心3 min，去上清，加入1 mLPBS重悬后转入新的1.5 mL EP管中，5000 rpm离心3 min，去上清后，PBS再次洗涤一次，留取细胞沉淀，-20℃保存，干冰运输。

b．悬浮细胞，数量不低于1*106个，将培养基及细胞转入EP管，5000 rpm离心3 min，去上清，加入1 mL PBS重悬后转入新的1.5 mL EP管中，5000 rpm离心3 min，去上清后，PBS再次洗涤一次，留取细胞沉淀，-20℃保存，干冰运输。

(3)蛋白样本：

客户自己提取好的蛋白样本，蛋白浓度应不低于2 μg/μl，-20℃保存，干冰运输。

三、细胞平台

1.活细胞

加满培养基；用不透气培养瓶；常温或4℃运输；培养瓶外用自封袋给予包装；细胞量在60-80%为宜；快递最好能在2天内到货；

2.冻存细胞

干冰运输，最好提供2管冻存细胞。

注意：

a.凡是需要我司进行培养的细胞都要求无菌；

b.直接实验的细胞必须保证细胞量；

c. 流式检测的细胞须告知是否携带有荧光标记。

四、病理学平台

1. 常规病理样本

(1)固定样本：

a.取材后立即固定，固定时间超过半年的样本做免疫组化或免疫荧光效果可能不好；

b.固定液体积至少为组织5倍以上，灌注固定的组织除外；

c.业务员对于客户组织的最终包埋切面要问询清楚，如果沟通不清楚可以当场给技术员电话让技术员跟客户沟通清楚是否可以达到客户要求，或者将客户样本取回让技术员看到样本后再跟客户进行细节沟通；

d.固定好的组织只能放在常温或4度冰箱保存，绝不能放在-20度冰箱保存； e. 如果现场验视客户组织样本处理不符合处理标准，如有的组织外观破烂不完整，包埋切片后达不到客户要求，要当场给客户说明不能接收；

(2)蜡块：

取样时跟客户核对清楚蜡块数量，常温运输；

(3)石蜡切片：

a.石蜡切片的保存与运输条件为常温或4度。

b.玻片应用专&用的盒子装好，并固定，避免运输过程中切片碎掉；

2. 透射电镜样本

(1)组织样本：

取材时应尽可能小，一般要求米粒大小，取材后立即用2.5%戊二醛或电镜专&用固定液固定，4℃保存，不可常温或冰冻保存，运输过程中应加入冰袋，且避免样本与冰袋直接接触；

(2)细胞样本：

细胞量要求1*106个，细胞消化离心后转移至1.5 mLEP管，PBS洗3遍后弃去PBS，向细胞沉淀中加入1 mL 2.5%戊二醛或电镜专&用固定液，然后轻轻将细胞沉淀吹散，4℃保存，不可常温或冰冻保存，运输过程中应加入冰袋，且避免样本与冰袋直接接触；

3. 抗体

(1)一抗的运输条件为4度冰盒运输；

(2)二抗及二抗试剂盒的运输条件为4度冰盒运输；

(3)若客户提供的一抗种属来源不是大鼠、小鼠、兔、山羊，则需要客户提供对应的二抗。